赤羽病病毒、牛疱疹病毒1型和牛病毒性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立

张帆帆; 韦家禛; 李杰茂; 谭美芳; 胡利珍; 曾艳兵; 龚小齐; 杨群; 徐俊; 《福建农业学报 》 2024 CSCD

摘要：【目的】旨在建立一种可同时检测赤羽病病毒（akabane virus, AKAV）、牛疱疹病毒1型（bovine herpesvirus1, BoHV-1）和牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）的多重RT-PCR检测方法，为牛繁殖障碍类疫病鉴别诊断及防控奠定基础。【方法】针对AKAV的S基因、BoHV-1的gH基因和BVDV的3'UTR保守区域设计3对引物，通过反应条件参数的优化，建立AKAV、BoHV-1和BVDV多重RT-PCR检测方法。【结果】特异性结果显示，该方法仅对AKAV、BoHV-1和BVDV阳性样品检测为阳性，对牛细小病毒（bovine parvovirus, BPV）、牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus, BRSV）、牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus 3, BPIV3）、口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus, FMDV）、牛流行热病毒（bovine ephemeral fever rhabdovirus, BEFV）等阳性样品检测为阴性。敏感性结果显示，该方法对AKAV、 BoHV-1和BVDV重组质粒的下限阈值均为1.0×103拷贝·μL-1。重复性结果显示，批内、批间重复性均较好。利用建立的方法对143份患繁殖障碍的牛全血/组织样品进行测定，并与现有的地方标准进行对比，验证本检测方法的实际临床应用效能。结果显示，AKAV、BoHV-1和BVDV的阳性率分别为2.80%(4/143)、 21.68%(31/143)、 38.46%(55/143)，存在混合感染现象，与AKAV、BoHV-1和BVDV地方标准检测方法的符合率为99.3%、98.6%和97.2%,Kappa系数分别为0.885、0.960和0.942，表明本研究建立的方法与地方标准检测结果一致性良好。【结论】本研究开创性建立了一种特异性强、灵敏度高和成本低的多重RT-PCR检测方法，适用于AKAV、BoHV-1和BVDV的鉴别检测。

关键词： 赤羽病病毒 牛疱疹病毒1型 牛病毒性腹泻病毒 多重RT-PCR 繁殖障碍