鹅星状病毒衣壳蛋白间接ELISA检测方法的建立

张帆帆; 李海琴; 谭美芳; 杨群; 涂凌云; 康冬柳; 罗士仙; 黄奕雯; 曾艳兵; 谭佳; 黄江南; 谢金防; 韦启鹏; 康昭风; 《中国预防兽医学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：为建立血清中鹅星状病毒(GoAstV)抗体检测的间接ELISA方法,本研究以GoAstV JX01/China/2021株基因组为模板优化并合成ORF2基因(1 bp-630bp),构建重组质粒pColdI-Cap,利用原核表达系统表达GoAstV重组Cap蛋白,以NI-NTA亲和层析柱纯化的重组Cap蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了 GoAstV间接ELISA抗体检测方法.结果显示重组Cap蛋白的最佳包被浓度为2.5 μμg/mL,10%马血清37℃封闭90 min,待检血清稀释度为1:50,孵育时间为37℃45 min,兔抗鹅IgG-HRP工作浓度为1:2 000,37℃孵育60 min.采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(GoCV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、坦布苏病毒(TMUV)、鹅呼肠孤病毒(GRV)、大肠杆菌(E.coli)等鹅源阳性血清进行检测,结果显示仅GoAstV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;将GoAstV阳性血清2倍倍比稀释后,利用本实验建立的GoAstV间接ELISA抗体检测方法及病毒中和试验方法同时检测,结果显示该方法的检测下限为1:400,而病毒中和试验的检测下限为1:200,表明该方法的敏感性较高;重复性试验结果显示,批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好.利用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测120份鹅血清,结果显示二者的符合率为94.2%,Kappa系数为0.868,表明两种方法一致性良好.利用本研究建立的间接ELISA方法对670份采自江西及周边省份的鹅血清样品进行检测,GoAstV的检出率为32.0%(214/670).本研究建立的检测GoAstV血清抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为GoAstV感染的诊断及流行病学调查提供切实可行的方法.

关键词： 鹅星状病毒 Cap蛋白 原核表达 间接ELISA