科研产出
月季3种病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用
《山西农业大学学报(自然科学版) 》 2025
摘要：[目的]月季是我国重要的观赏花卉，李属坏死环斑病毒（prunus necrotic ringspot virus,PNRSV）、苹果茎沟病毒（apple stem grooving virus,ASGV）、月季潜隐病毒1（rose cryptic virus 1,RCV1）是侵染月季的主要病毒，与其它病毒复合侵染月季时，对其生长和发育可造成严重影响。本文旨在建立灵敏、便捷地检测月季中这3种病毒的RT-LAMP检测方法。[方法]本研究以病毒CP基因为靶序列设计特异性引物，建立侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的RT-LAMP检测方法，并对反应体系中Mg2+浓度和dNTP使用浓度、反应温度和反应时间进行了优化，并对反应灵敏度和特异性进行了检测。[结果]该方法在恒温条件（61℃）下即可对目标病毒实现可视化特异性检测，检测体系中Mg2+和dNTP最佳使用浓度分别为5.0 mmol/L和1.2 mmol/L；本研究所建立的RT-LAMP检测方法，RCV1、PNRSV和ASGV可以检测到病毒的最低浓度分别为3.19×10～5、6.44×10～4和4.04×10～4拷贝/μL，灵敏度是RT-PCR的100～1000倍，而且检测体系具有很好的反应特异性，与侵染月季的其它病毒之间不存在交叉反应；使用该RT-LAMP检测方法随机对田间19个样品进行检测，可通过颜色变化，能准确检测出样品中的目标病毒，而无需借助琼脂糖凝胶电泳或其它专门仪器。[结论]该方法可通过直接添加染料实现可视化，具有快速、便捷、特异性好特点，适用于侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的快速诊断及田间监测。
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植物青枯病菌环介导等温扩增快速检测技术研究
《生物技术通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为实现植物青枯病的早期诊断,需要建立一种适于田间快速便捷检测青枯病菌的方法.以细胞色素C基因为靶标设计一套特异性引物,建立了植物青枯病的LAMP检测方法.此方法最低检测极限为1 pg,可在1 h内完成,不依赖昂贵复杂的仪器,结果可经肉眼观察.利用此方法,在人工接种发病的茄子、番茄、花生、芝麻和凹头苋茎部浸出液和马铃薯病薯块茎组织液中均检测出青枯病菌的存在,尤其适用于田间疑似罹病的芝麻、花生、番茄、马铃薯和甘薯等植株的检测,且LAMP法的检出率远高于PCR法.应用LAMP技术检测青枯病菌快速高效、特异性强、灵敏度高,操作简单,适于在基层推广运用.
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