文献类型: 中文期刊
作者: 陶丽寒 1 ; 吴诚诚 2 ; 林翠 2 ; 康昭风 2 ; 黄建珍 1 ;
作者机构: 1.江西农业大学动物科学技术学院
2.江西省农业科学院畜牧兽医研究所
关键词: 猪德尔塔冠状病毒;非结构蛋白13;解旋活性;抗病毒药物
期刊名称: 生物工程学报
ISSN: 1000-3061
年卷期: 2024 年 40 卷 012 期
页码: 4573-4585
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是导致哺乳仔猪致命性腹泻的一种重要病原体,目前缺少有效防治该病毒的疫苗和药物.非结构蛋白 13(NSP13)是一种病毒编码的解旋酶,被认为是抗病毒药物的重要靶点,因此有必要对其解旋活性进行研究.本研究以PDCoV的NSP13 基因为模板,将其插入到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-NSP13.NSP13蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并进行了纯化.验证了NSP13 蛋白的活性,并且探究了影响 NSP13 解旋酶活性的因素.结果表明,PDCoV的NSP13 蛋白能够在原核系统中表达,纯化后的NSP13 具有解旋活性,能够解开具有 5?tailed的双链DNA.此外,NSP13 还具有促进核酸单链的碱基互补配对形成双链的退火功能.金属离子的种类会影响NSP13的解旋活性,但在0.5-6.0 mmol/L范围内的Mg2+浓度对NSP13 解旋活性无明显影响.当溶液pH在 4-9 范围内,NSP13 解旋活性无明显差异.在 0.25-6.00 mmol/L 范围内的 ATP 浓度对 NSP13 解旋活性存在微弱的影响,NSP13浓度≥80 nmol/L则会抑制解旋活性.本研究获得了重组表达的PDCoV NSP13 蛋白并对其解旋酶活性进行了探究,为深入理解 NSP13 调控 PDCoV 复制的机制和抗冠状病毒药物的研发奠定了理论基础.
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