文献类型: 中文期刊
作者: 邹芬 1 ; 何烈干 1 ; 李湘民 1 ; 黄瑞荣 1 ; 马辉刚 1 ;
作者机构: 1.江西省农业科学院植物保护研究所
关键词: 辣椒;三重PCR;辣椒疫霉;白绢病菌;青枯病菌
期刊名称: 南方农业学报
ISSN: 2095-1191
年卷期: 2022 年 012 期
页码: 3453-3459
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 【目的】建立简便、快速、准确同时检测辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、白绢病菌(Sclerotium rolfsii)和青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的多重PCR检测体系,为辣椒多种土传病害同时早期诊断提供技术支撑。【方法】以3种辣椒土传病害病原菌辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌为研究对象,参考相关文献筛选出3种病原菌的3对特异性引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R,以引物浓度、退火温度、循环次数及延伸时间为变异因子,探索最佳反应体系,建立三重PCR检测方法,并基于田间实际发病样品对方法进行验证。【结果】优化的三重PCR反应体系25.0μL:3对引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R浓度分别为0.24、0.24和0.28μmol/L,DNA模板各10 ng,2×Multiplex PCR Mix 12.5μL,ddH2O补足至25.0μL。最佳扩增程序:94℃预变性1 min;94℃30 s,55.8℃30 s,72℃45 s,进行35个循环;72℃延伸10 min。建立的三重PCR体系可分别扩增出352、540和724 bp的特异性目的片段,体系灵敏度达10-1ng/μL。利用建立的反应体系,对来自江西省不同市(县)的54份辣椒和土壤样品进行检测,样品检出率为100%。【结论】建立的三重PCR检测体系可对辣椒田间发病植株和土壤中辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌进行快速、准确检测,可应用于辣椒多种土传病害并发的早期预防和流行监测。
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