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芝麻RSAP-PCR反应体系的正交优化与验证
《基因组学与应用生物学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要:限制性位点扩增多态性(RSAP)是一种新型分子标记技术。为获得适用于芝麻的RSAP-PCR的反应体系,本研究通过L16(45)正交设计与单因素试验相结合的方法,对PCR反应体系中模板DNA、Mg2+、d NTPs、引物和Taq DNA聚合酶等影响因素进行了试验优化。结果表明,芝麻RSAP-PCR的最佳反应体系为:在15μL反应体系中,30 ng模板DNA、2.0 mmol/L的Mg2+、0.3 mmol/L的d NTPs、0.6μmol/L的引物和1.0 U的Taq DNA聚合酶。利用17个芝麻品种对该体系进行了稳定性验证和多态性检测,结果表明,该反应体系稳定、可靠,29对随机引物组合共扩增DNA条带454条,每对引物扩增8~21条,平均15.66条,多态性比例为0%~56.25%,平均25.77%。利用普通芝麻与有限生长习性芝麻构建的F2分离群体对RSAP标记进行了初步遗传验证,结果表明,F2群体植株中出现了亲本位点的分离。该RSAP-PCR反应体系的建立与优化为芝麻遗传多样性分析、连锁图谱构建和分子标记辅助育种提供了新技术。
芝麻RMAPD分子标记反应体系的正交优化及应用
《分子植物育种 》 2015 北大核心 CSCD
摘要:RMAPD是将RAPD和SSR相结合而开发的新型分子标记。本研究采用L16(45)正交设计试验和单因素试验相结合的方法,对影响芝麻RMAPD-PCR反应的模板DNA、Mg2+、d NTPs、引物和Taq聚合酶等因素进行了优化。结果表明,芝麻RMAPD-PCR的最佳反应体系(15μL)为:模板DNA用量30 ng、Mg2+浓度2.0 mmol/L、d NTPs浓度0.3 mmol/L、RAPD引物浓度1.0滋mol/L、SSR引物浓度0.4滋mol/L和Taq聚合酶1.0 U。利用该PCR体系开展了芝麻遗传多样性分析和遗传群体多态性检测试验,21对随机引物组合在16个芝麻品种中共扩增DNA条带413条,每对引物扩增14~29条,平均19.7条,多态性比例为12.50%~62.96%,平均29.78%;RMAPD标记在F2群体植株中出现了亲本位点的分离。研究结果表明,该RMAPD-PCR反应体系稳定、可靠,RMAPD标记是一种可以用于芝麻遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建和分子标记辅助育种等研究的新技术。
辐射诱变育成的黑芝麻品种赣芝9号DNA变异的SRAP分析
《江西农业学报 》 2014
摘要:赣芝9号是我国首个通过辐射诱变育种技术选育而成的黑芝麻品种。利用SRAP标记对赣芝9号及其对照种武宁黑进行分子鉴定,结果显示,23对随机引物共扩增出DNA条带625条,多态性带36条,多态性比率5.76%;其中,赣芝9号新增带15条,占2.48%,缺失带21条,占对照的3.44%。辐射诱变选育的黑芝麻新品种赣芝9号与原始对照种武宁黑之间存在明显的分子变异,辐射诱变是一种有效的黑芝麻育种途径,SRAP对芝麻辐射诱变的分子鉴定是可行的。
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