科研产出
三重PCR检测茄子青枯病菌、黄萎病菌和白绢病菌
《植物保护学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为快速、准确对田间茄子发病植株和土壤中3种土传病害的病原菌青枯病菌Ralstonia solanacearum、黄萎病菌Verticillium dahliae和白绢病菌Sclerotium rolfsii进行检测，筛选这3种病菌的特异性引物，建立这3种病菌的三重PCR检测体系，对其退火温度、引物浓度、10×PCR Buffer（Mg2+plus）、dNTP和Taq DNA聚合酶进行优化，对优化后体系的特异性和灵敏度进行检测，并利用优化体系对田间采集的病害样品和土壤样品进行检测。结果表明，在优化后的50μL三重PCR检测体系中，RS-1-F/RS-3-R、dllz1/dllz2和SRITSF/SRITSR引物的最佳浓度分别为0.16、0.16和0.28μmol/L,10×PCR Buffer（Mg2+plus）、dNTP和Taq DNA聚合酶体积分别为6、5和1μL，检测体系的最佳退火温度为54℃。按照优化后的反应条件能分别扩增出青枯病菌、黄萎病菌和白绢病菌3种病菌的特异条带，分别为716、350和500 bp，其他对照病菌无条带。该体系对病菌DNA检测灵敏度达到0.1 ng/μL。该检测体系对田间采集的病害样品和土壤样品中病菌的检出率达95%以上。
关键词： 茄子 土传病害 三重PCR 青枯病菌 黄萎病菌 白绢病菌
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辣椒土传病原菌三重PCR检测体系的建立与应用
《南方农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立简便、快速、准确同时检测辣椒疫霉（Phytophthora capsici）、白绢病菌（Sclerotium rolfsii）和青枯病菌（Ralstonia solanacearum）的多重PCR检测体系，为辣椒多种土传病害同时早期诊断提供技术支撑。【方法】以3种辣椒土传病害病原菌辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌为研究对象，参考相关文献筛选出3种病原菌的3对特异性引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R，以引物浓度、退火温度、循环次数及延伸时间为变异因子，探索最佳反应体系，建立三重PCR检测方法，并基于田间实际发病样品对方法进行验证。【结果】优化的三重PCR反应体系25.0μL:3对引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R浓度分别为0.24、0.24和0.28μmol/L,DNA模板各10 ng,2×Multiplex PCR Mix 12.5μL,ddH2O补足至25.0μL。最佳扩增程序：94℃预变性1 min;94℃30 s,55.8℃30 s,72℃45 s，进行35个循环；72℃延伸10 min。建立的三重PCR体系可分别扩增出352、540和724 bp的特异性目的片段，体系灵敏度达10-1ng/μL。利用建立的反应体系，对来自江西省不同市（县）的54份辣椒和土壤样品进行检测，样品检出率为100%。【结论】建立的三重PCR检测体系可对辣椒田间发病植株和土壤中辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌进行快速、准确检测，可应用于辣椒多种土传病害并发的早期预防和流行监测。
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