科研产出
茶树菇原生质体再生及单核体菌株的特性
《微生物学通报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【背景】茶树菇遗传育种工作是茶树菇产业持续发展的保障和关键，原生质体的制备及单核体菌株的获得可为茶树菇遗传育种工作的开展提供技术支持。【目的】获得茶树菇原生质体的再生特性、单核化特性及其交配型，为开展茶树菇的杂交育种、融合育种、诱变育种、遗传转化和功能基因挖掘等奠定基础。【方法】以茶树菇保藏菌种Aa11的菌丝为材料，采用甘露醇溶液和溶壁酶溶液直接处理平板菌丝制备茶树菇原生质体，而后对原生质体进行分离和再生培养。通过原生质体单核菌丝体两两单单对峙培养，观察对峙培养过程中的菌落形态变化。【结果】当接种块数量为7、酶解温度为33-34℃、酶解时间为60-80 min时，原生质体数量为107个/mL。茶树菇原生质体在涂布平板7 d后肉眼才可见明显的再生菌落形成，在再生培养基上再生率为0.71%，单核化率为41.1%；再生异核体和再生单核体在形成再生菌落时有时间差，从第7天开始往后连续3 d的再生菌落均为异核体菌株，往后第4天开始陆续出现单核体菌落，之后时间内的菌落均为单核体菌株。试验共得到290个原生质体单核体，分为A1B1和A2B2两种亲本交配型，A1B1和A2B2二者的比例为138:152；两种交配型的单核体在菌落形态上都表现为气生菌丝旺盛、颜色浓白，A1B1单核体的生长速度要快于A2B2单核体。双亲菌落接触部位存在一条明显比周围菌丝体稀疏的分界线，双亲菌落接触区域的分界线均向菌落扩大速度慢的亲本菌落弯曲。【结论】两种交配型单核体菌株及其对峙培养后的菌落形态变化特征可为茶树菇杂交育种的亲本选择提供依据。
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模式籼稻品种Kasalath转基因胚性悬浮细胞系的建立
《江西农业大学学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：Kasalath是一种公认的组培再生性优异的模式籼稻品种。为建立具有G418抗性的Kasalath悬浮细胞系,通过农杆菌转化法获得转入G418抗性基因和GUS报告基因的Kasalath愈伤组织,然后利用获得的胚性转基因愈伤在NBL培养基中进行初步悬浮培养,后转至AA培养基进行终培养,在继代过程中通过持续的小颗粒愈伤筛选最终建立了Kasalath转基因悬浮细胞系;本研究获得的悬浮细胞系分散性良好,增值快(10 d可增殖约3.8倍),而且可从悬浮细胞中分离到高活性的原生质体,分离效率可达6.3×107个原生质体每毫升自然沉降细胞。本研究展示了Kasalath是一种建立悬浮细胞系的优良材料,为进一步进行栽培稻和野生稻的原生质体融合提供依据,建立的悬浮细胞系亦可用于生理生化研究或供分离原生质体以进行蛋白质亚细胞定位等试验。
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芦笋茎枯病菌原生质体的制备及再生
《植物保护学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：原生质体的制备是真菌遗传转化的基础,为了解芦笋茎枯病菌Phomopsis asparagi的遗传转化体系,以芦笋茎枯病菌Pa1100为供试菌株,研究了细胞壁裂解酶、酶解时间、稳渗剂等对芦笋茎枯病菌原生质体制备的影响及稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明可制备芦笋茎枯病菌原生质体较为适宜的条件是:CM液体培养基中培养分生孢子3 d,以1.5%裂解酶、1%崩溃酶和1.5%蜗牛酶为组合酶解液,33℃水浴酶解4.5 h,以PBS(pH 6.98)与1 mol/L MgSO4混合液为酶解稳渗剂。含0.6 mol/L蔗糖的PDA培养基较适合于芦笋茎枯病菌原生质体的再生。
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