文献类型： 中文期刊
作者： 盛文涛 1 ; 周劲松 1 ; 汤泳萍 1 ; 罗绍春 1 ; 陈光宇 1 ;
作者机构： 1.江西省农业科学院生物工程中心
关键词： 芦笋;SRAP;反应体系;优化;引物筛选
期刊名称： 分子植物育种
ISSN： 1672-416X
年卷期： 2010 年 03 期
页码： 204-210
收录情况： CSCD
摘要： 本研究以芦笋基因组总DNA为模板,通过对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化,建立了一套适用于芦笋的SRAP反应体系:25μL的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2+浓度3.0mmol/L、上下游引物各0.2μmol/L、dNTPs0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶1U以及1×Buffer。扩增程序为:94℃预变性3min;94℃30s、35℃30s、72℃1.5min,5个循环;然后退火温度提高到50℃,35个循环;最后72℃延伸10min。比较琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SRAP扩增产物的多态性,结果发现:6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物比琼脂糖的效果好。利用该优化体系筛选引物,从256个SRAP引物组合中筛选出239个,它们具有扩增条带清晰、丰富、重复性好的优点,证明了此优化体系稳定可靠。
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