科研产出
坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达、生物信息学分析及鼠源多克隆抗体制备
2025
摘要：目的对坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）NS1蛋白进行生物信息学分析，原核表达NS1蛋白并制备鼠源NS1多克隆抗体，为TMUV检测及NS1蛋白功能研究提供理论基础。方法使用ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、NetPhos 3.1、NetNGlyc-1.0、YinOYang-1.2、SOPMA、AlphaFold2等生物信息学软件分析NS1蛋白氨基酸组成、理论等电点、亲/疏水性、跨膜结构域、信号肽、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构。扩增
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芦丁对山羊组织脂肪酸合成和代谢相关基因表达的影响
《江西畜牧兽医杂志 》 2023
摘要：本试验旨在研究芦丁对山羊组织脂肪酸合成和代谢相关基因表达的影响。试验选取36只体重相近且健康的努比亚山羊，随机分成3组，每组12只羊。对照组不添加芦丁，两个试验组分别添加25mg/kg、50 mg/kg芦丁，试验期为70d。结果表明：（1）芦丁对山羊肝脏、空肠和肌肉的ACOX1 mRNA表达量无显著影响（P＞ 0.05）。（2）与对照组相比，50mg/kg组山羊肝脏的PPAR-γ和ACACA mRNA表达量显著升高（P ＜0.05）,25 mg/kg组山羊空肠的PPAR-γ mRNA表达量显著升高（P ＜0.05）。对照组山羊肌肉的PPAR-γ和ACACA mRNA表达量显著高于其他两组（P ＜0.05）。（3）与对照组相比，25 mg/kg和50 mg/kg组山羊肝脏的FASN mRNA表达量显著升高（P ＜0.05），而空肠的FASN mRNA表达量则相反。50 mg/kg组山羊肌肉的FASN mRNA表达量显著低于其他两组（P ＜0.05）。综上所述，芦丁能够通过调控脂肪酸合成和代谢相关基因的表达来影响山羊体内脂肪的沉积。
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猪ISG15基因表达、多态性及其与繁殖性状的关联分析
《江西农业大学学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]明确干扰素刺激基因15(ISG15)在猪不同妊娠时期母胎界面中的表达规律,分析ISG15基因多态位点在中外猪种中的遗传多样性及与繁殖性状的关联性,拟为揭示ISG15基因在猪繁殖功能中发挥的作用提供重要数据.[方法]利用实时荧光定量PCR方法检测ISG15基因在大白猪妊娠15,26,50 d子宫内膜和绒毛膜中的表达水平变化,通过测序比对筛选ISG15基因多态位点,采用PCR-RFLP方法检测多态位点在大白、梅山猪、清平猪、通城猪、大花白猪中的遗传多样性,并利用SPSS19.0分析ISG15基因多态位点与繁殖性状的关联性.[结果]ISG15基因在妊娠26 d子宫内膜和绒毛膜组织中表达水平均显著高于妊娠50 d(P<0.01),并于第二外显子中存在一个NM_001128469.3:c.301A>G同义突变位点.该位点在5个猪品种群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态,但在地方猪种中,c.301A>G位点处于低度多态,以AA基因型为主,而在大白群体中,c.301A>G位点则处于中度多态,以AG基因型为主.进一步进行繁殖性状关联分析,结果显示,在大白经产母猪群体中,AA基因型母猪在总产仔数和产活仔数方面均显著高于AG基因型和GG基因型母猪(P<0.05).[结论]ISG15基因在妊娠早期母胎界面中表达,其c.301A>G位点基因型在中外猪种中呈差异分布,且与产仔数性状显著性相关,暗示ISG15基因可能参与猪产仔数性状的调控.
关键词： 猪 ISG15基因 表达水平 遗传多样性 关联分析
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鹅星状病毒衣壳蛋白间接ELISA检测方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为建立血清中鹅星状病毒(GoAstV)抗体检测的间接ELISA方法,本研究以GoAstV JX01/China/2021株基因组为模板优化并合成ORF2基因(1 bp-630bp),构建重组质粒pColdI-Cap,利用原核表达系统表达GoAstV重组Cap蛋白,以NI-NTA亲和层析柱纯化的重组Cap蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了 GoAstV间接ELISA抗体检测方法.结果显示重组Cap蛋白的最佳包被浓度为2.5 μμg/mL,10%马血清37℃封闭90 min,待检血清稀释度为1:50,孵育时间为37℃45 min,兔抗鹅IgG-HRP工作浓度为1:2 000,37℃孵育60 min.采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(GoCV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、坦布苏病毒(TMUV)、鹅呼肠孤病毒(GRV)、大肠杆菌(E.coli)等鹅源阳性血清进行检测,结果显示仅GoAstV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;将GoAstV阳性血清2倍倍比稀释后,利用本实验建立的GoAstV间接ELISA抗体检测方法及病毒中和试验方法同时检测,结果显示该方法的检测下限为1:400,而病毒中和试验的检测下限为1:200,表明该方法的敏感性较高;重复性试验结果显示,批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好.利用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测120份鹅血清,结果显示二者的符合率为94.2%,Kappa系数为0.868,表明两种方法一致性良好.利用本研究建立的间接ELISA方法对670份采自江西及周边省份的鹅血清样品进行检测,GoAstV的检出率为32.0%(214/670).本研究建立的检测GoAstV血清抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为GoAstV感染的诊断及流行病学调查提供切实可行的方法.
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朱红橘果实成熟过程中类胡萝卜素的积累及相关基因的表达分析
《核农学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为探究朱橘类果实成熟过程中类胡萝卜素的积累及相关基因的表达模式,本研究以朱红橘为材料,使用手持色差仪测定果实成熟过程中果皮和果肉的色差值,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测类胡萝卜素组分的含量变化,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析类胡萝卜素代谢相关基因的表达。结果表明,朱红橘成熟过程中,果皮和果肉的色差值均逐渐上升,至完全成熟时,果皮色差值远高于果肉;果皮和果肉中类胡萝卜素组分基本相同,但在果肉中未检测出β-柠乌素和β-阿朴胡萝卜素醛,类胡萝卜素含量随着果实成熟逐渐增加;除PDS、LCYE、ZEP外,大部分类胡萝卜素相关基因的表达量呈上调趋势;相关性分析结果显示,PSY、ZDS、HYD基因与类胡萝卜素含量呈显著或极显著相关。本研究为柑橘功能成分类胡萝卜素的开发利用提供了理论依据。
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甜瓜Dof家族全基因组鉴定与表达分析
《园艺学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：基于甜瓜全基因组数据信息,利用生物信息学方法对甜瓜Dof家族基因进行了全面鉴定和系统发育分析,并通过Real-time PCR方法检测了CmDof家族成员对模拟干旱(PEG6000)、盐和低温胁迫的应答。结果表明:在甜瓜中存在34个Dof基因,除1、5和7号染色体外其余染色体均有分布,发生11次染色体片段重复事件和2次串联重复事件,外显子数在1～3之间,其蛋白质等电点在4.95～9.59之间;蛋白序列系统发育分析显示CmDof蛋白可分为9个进化亚群;组织表达模式分析发现该家族基因具有一定的时空表达特异性;多数CmDof基因对PEG6000、盐和低温胁迫有响应,其中CmDof3/CmDof5/CmDof10/CmDof17、CmDof3/CmDof5/CmDof10和CmDof3/CmDof5/CmDof32分别响应PEG6000、盐和低温胁迫。
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铝胁迫下金沙柚3个WRKY基因的生物信息学与表达分析
《江西农业大学学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：WRKY是植物中特有的具有锌指结构的转录因子家族之一,在植物非生物逆境胁迫应答中起着重要的调控作用。为研究金沙柚WRKY在铝胁迫条件下的作用,研究在前期构建的金沙柚铝胁迫转录组数据基础上,利用生物信息学方法从金沙柚根中得到了能显著响应铝胁迫的3个WRKY基因(Cg4g001470、Cg7g003890和Cg6g010690),开放阅读框长度分别为966、933和993 bp,各编码321、310和330个氨基酸,分别命名为CgWRKY40、CgWRKY70-1和CgWRKY70-2,氨基酸序列和结构分析显示,这3个基因编码的蛋白分别属于WRKY蛋白的IIa、III a和III a类型,PSORT亚细胞定位预测均定位于细胞核。实时荧光定量PCR分析表明,3个WRKY基因在金沙柚的嫩根、老根、茎和叶的表达量存在较大差异,在老根的表达量均最高;在铝胁迫处理后,均能出现不同程度的上调表达,相对表达量分别为处理前的4.58、1.52和12.06倍。在铝胁迫条件下,水杨酸能较大幅度的调控3个WRKY基因的上调表达,分别为对照的133.80、33.39和114.23倍;过氧化氢调控3个WRKY基因出现显著上调表达,分别为对照的86.40倍、7.93倍和102.32倍;水杨酸与过氧化氢共同作用下能调控3个WRKY基因出现不同程度的上调表达,分别为对照的51.81倍、1.51倍、37.72倍。上述研究表明,3个WRKY基因均能参与铝胁迫响应,且均可以被水杨酸、过氧化氢、水杨酸与过氧化氢调控上调表达。
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甜瓜CmCRL1的克隆与表达分析
《园艺学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：以甜瓜(Cucumis melo L.)品系'L8'为试材,采用PCR方法克隆到CmCRL1(Crown Rootless1)基因,登录号为MELO3C012908,并通过Real-timePCR方法检测了CmCRL1的组织表达特异性和对低温、山梨醇、PEG6000、盐胁迫和淹水胁迫的响应模式.结果显示:CmCRL1含2个外显子和1个内含子,cDNA序列长度为996 bp,开放阅读框(ORF)长度为732 bp,编码243个氨基酸;CmCRL1蛋白中存在1个保守的LOB结构域,属于LBD/AS2(Lateral Organ Boundaries Domain/Asymmetric Leaves2)家族成员;多重比对分析发现CmCRL1与黄瓜Csa3G396920、西瓜Cla005992、拟南芥AtLBD16和AtLBD29、水稻OsCRL1、玉米ZmRTCS和ZmRTCL的LOB结构域高度保守,序列相似性分别为100%、99.02%、74.51%、86.27%、88.24%、89.22%和80.39%;组织表达特异性分析显示CmCRL1在根中优势表达,表达量分别是子叶、下胚轴、上胚轴、叶片和茎尖的178.39倍、7.54倍、26.95倍、65.19倍和75.86倍;Cm CRL1能响应低温、山梨醇、PEG6000和盐等胁迫;此外,在淹水胁迫下甜瓜不定根发生过程中CmCRL1表达上调.
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‘兴国灰鹅’均衡生产VIP基因的表达规律
《中国农学通报 》 2016 CSCD
摘要：为了解‘兴国灰鹅’在不同繁殖季节VIP基因在下丘脑、垂体、输卵管和卵巢中的表达情况,本试验抽取不同光照长度下‘兴国灰鹅’下丘脑、垂体、输卵管和卵巢的组织样本,进行荧光定量PCR。对照组在整个试验阶段自然产蛋和休产,试验组通过人工控制光照在整个试验阶段接受短或长光照处理,使其与对照组在相反的季节开产和休产。利用荧光定量PCR检测试验组和对照组产蛋期和休产期的VIP表达情况。结果表明:试验组休产时垂体VIP的表达明显高于开产的对照组(P<0.05);试验组开产时下丘脑VIP的表达明显低于休产的对照组(P<0.05),卵巢和输卵管表达试验组和对照组无明显差异。结果证明VIP的表达在休产期高于产蛋期。
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马尾松毛虫质型多角体病毒非结构蛋白p44在Bac-to-Bac系统中的表达和亚细胞定位
《生物技术通报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为探寻马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV 1)p44蛋白的功能,构建了DpCPV 1基因组S8片段的原核表达体系,表达纯化蛋白后免疫家兔制备了多克隆抗体。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建了3种重组的杆状病毒质粒(Bacmid-p44、Bacmid-p44-e GFP和Bacmid-e GFP)。转染昆虫细胞Sf9进行表达,通过Western blot检测和蛋白的亚细胞定位观察。Western blot检测结果显示,Bacmid-S8在昆虫细胞Sf9中表达实际蛋白的大小为35 kD,比在原核系统中表达的蛋白(44 k D)略小;利用激光共聚焦显微镜观察p44-e GFP的融合蛋白的亚细胞定位发现,融合p44的绿色荧光蛋白(eGFP)主要聚集在细胞质中,而未融合的eGFP则分布于整个细胞,说明DpCPV 1的p44蛋白定位于细胞质中。
关键词： 马尾松毛虫质型多角体病毒 多克隆抗体 真核表达 细胞定位
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